Микробиология, понятие микробиологии, статьи по микробиологии, микробиологические процессы

Архив рубрики «Абортивная трансдукция»

Таким образом, некоторые Со1факторы могут выполнять функции полового фактора. Это обусловлено наличием в их структуре генов, детерминирующих синтез необходимых для конъюгации половых ворсинок. Наличие таких ворсинок у некоторых колициногенных бактерий было выявлено в электронном микроскопе (63).
Колициногенные факторы, обусловливающие возможность конъюгации, детерминируют два типа ворсинок, различие которых устанавливается на основании способности клеток адсорбировать соответствующие фаги.
Изучение колициногенных факторов имеет не только теоретическое, но и практическое значение. Колицины, присущие кишечным палочкам нормальным обитателям кишечника, могут губительно действовать на патогенных бактерий кишечной группы, попавших в кишечник, и способствовать нормализации естественного биоценоза кишечника.
Способность продуцировать колицины может быть использована для тинирования бактерий с целью эпидемиологического анализа. Такое тинирование осуществляется путем определения типа колицина, образуемого патогенными бактериями, выделенными от больных, контактировавших с. ними лиц, а также из окружающей их среды.

Абортивно трансдуцируются фрагменты хромосомы, детерминирующие подвижность бактерий. В этом случае абортивно трансдуцированные клетки дают следы микроколоний в полутвердой среде (46).
Частота абортивной трансдукции значительно выше, чем трансдукции, заканчивающейся интеграцией генетического материала донора (101) использование генетических рекомбинаций для установления локализации (картирования) генов Генетические рекомбинации, совершающиеся при конъюгации, трансдукции и трансформации, дают возможность устанавливать расположение генов на бактериальной хромосоме и исследовать их тонкую структуру.
Определение локализации генов на бактериальной хромосоме называют генетическим картированием, а схему, отражающую эту локализацию, генетической картой. Расположение генов на генетической карте устанавливается скрещиванием бактерий с последующим выделением рекомбинантов и детальным анализом присущих им генотипов.

Для генетического анализа обычно отбирают рекомбинанты по одному признаку, например по приобретению способности синтеза какойлибо аминокислоты или по резистентности к антибиотикам. Этот признак называют селективным.
При любом способе скрещивания (конъюгации, трансдукции или трансформации) необходимо создание условий, обеспечивающих селекцию образующихся рекомбинантов. В случае трансдукции и трансформации это сделать относительно несложно, так как трансдуцирующий и трансформирующий факторы (фаголпзат и трансформирующая ДНК) не содержат живых бактерий. Для отбора рекомбинантов требуется подобрать среду, на которой не могут расти бактерииреципиенты, но способны давать рост рекомбинанты. Если например, реципиентом является штамм, неспособный синтезировать триптофан, а трансдуцирующий фаголизат получен из бактерий, синтезирующих эту аминокислоту, то селективной средой для отбора рекомбинантов должна быть среда, лишенная триптофана. На этой среде клетки реципиента не будут расти, а рекомбинанты, которые приобрели способность синтезировать триптофан, будут формировать колонии.

Несколько сложнее подобрать селективную среду при конъюгации, так как в этом случае при высеве бактерий после скрещивания вместе с рекомбинантами высеваются живые клетки и реципиента, и донора. Поэтому в качестве реципиента берут штамм, не только зависимый по данной аминокислоте, например, триптофану, но и резистентный к стрептомицину. Донором служит независимый но триптофану (ирототроф), но чувствительный к стрептомицину. Селективной средой в данном случае является глюкозо солевая среда, содержащая все аминокислоты, кроме одной, по которой ведется селекция (в данном случае триптофан). К селективной среде добавляется стрептомицин. Стрептомицин убивает клетки донора, а клетки реципиента не растут на такой среде из за отсутствия триптофана. Расти будут только рекомбинанты, которые сохранили стрептомицино устойчивость реципиента и приобрели способность синтеза триптофана за счет включения в хромосому реципиента try+ гена донора.

Схематически такая постановка опыта изображена на 47. Отбор рекомбинантов можно производить и другим методом, когда в качестве донора и реципиента используются штаммы, зависимые по разным аминокислотам. В этом случае к селективной среде не добавляют аминокислоты, необходимые донору, а также аминокислоту, необходимую реципиенту,, относительно которой ведется отбор рекомбинантов. Например, если реципиентом является штамм, зависимый по гистидину и метионину, то при отборе 1ту+рекомбинантов в селективной среде не должно быть триптофана, гистидина и метионина. На такой среде клетки донора не будут расти в результате отсутствия гистидина и метионина, а клетки реципиента не дадут роста вследствие отсутствия триптофана. Дадут рост рекомбинанты, которые приобрели способность синтеза триптофана от донора и сохранили способность синтеза гистидина и метионина, присущие реципиенту.